金秋9月,烈冰重磅推出了14999元/樣本單細胞測序服務新方案!包括PanoCell微孔芯片+BD磁珠+BD全套試劑+BD全套Protocol的一站式精準服務??梢垣@得完整的樣本基因表達信息,幫助用戶更好的對細胞進行注釋。
作為烈冰自主研發(fā)的首款單細胞測序的產(chǎn)品,Panocell微孔芯片不僅僅是降低了實驗成本,在實戰(zhàn)結(jié)果上更是擁有與BD原裝微孔板相媲美的表現(xiàn)!空口無憑,接下來小編為大家奉上新鮮出爐的實戰(zhàn)數(shù)據(jù)測評。當然,在這之前請跟隨小編簡單回顧下PanoCell實驗測評內(nèi)容吧~
實驗性能(Experimental performance)
PanoCell芯片的細胞捕獲表現(xiàn)十分出彩,多次實驗的驗證下,PanoCell與BD原裝芯片的捕獲細胞情況是高度一致的。
下圖為:PanoCell vs BD原裝實驗效果對比
與BD Rhapsody?單細胞平臺高度適配,實現(xiàn)與BD全套試劑和protocol的無縫對接,搭配烈冰一站式精準服務,為您的科研提供最大助力!
下圖為PanoCell:細胞+磁珠落孔、回收實拍結(jié)果
實驗過程眼見為實,數(shù)據(jù)結(jié)果更不是紙上談兵。接下來,小編為您呈現(xiàn)新鮮滾燙的實驗數(shù)據(jù)測評結(jié)果??!
注:以下數(shù)據(jù)結(jié)果均來源于同一樣本(肺組織)解離后的細胞懸液,相同實驗條件(時間,儀器,試劑,初始上機細胞數(shù)等,即除捕獲芯片外其他條件均一致)和實驗人員操作下獲得實測數(shù)據(jù)。
Part 1 捕獲細胞數(shù)量實測
眾所周知,單細胞測序需在分析過程中根據(jù)Cell Barcode確認有效的細胞數(shù)量。我們對同一細胞懸液,隨機分選相同細胞數(shù)量后進行上機捕獲,以默認按UMI500條件篩選細胞(低于UMI500的很可能是懸液中游離RNA或細胞碎片)結(jié)果顯示,兩種微孔板得到的曲線情況非常接近。
實際數(shù)據(jù)來看:
①捕獲細胞數(shù)量:兩個樣本分別捕獲2944個細胞(PanoCell)和3145個細胞(BD);
②Mean Reads per Cell:均在45K reads以上,符合單細胞數(shù)據(jù)分析標準,其中PanoCell :48.5k reads per cell,BD:45.18k reads per cell;
③數(shù)據(jù)利用率(Fraction Reads in Cells):達到了理想值80%以上;
④數(shù)據(jù)利用率與測序飽和度(Sequencing Saturation)方面,PanoCell微孔板稍優(yōu)于BD微孔板。相同條件下細胞捕獲數(shù)量和測序深度近乎一致,PanoCell微孔板在數(shù)據(jù)質(zhì)控環(huán)節(jié)表現(xiàn)出色。
為測評實際捕獲細胞基因表達情況,我們分析了Gene 和UMI Counts等數(shù)據(jù)指標,結(jié)果顯示:PanoCell和BD微孔板不僅在細胞捕獲數(shù)量上沒有明顯差異,在捕獲總Gene數(shù)量(24635 vs 24961),平均中位數(shù)基因(2835.5 vs 2689),中位數(shù)UMI Counts(6341.5 vs 6049)上也近乎一致。具體數(shù)值見下表:
數(shù)據(jù)mapping到基因組環(huán)節(jié),PanoCell和BD樣本mapping到基因組上的reads數(shù)分別為25179.86和23358.47,PanoCell樣本的mapping結(jié)果稍優(yōu)于BD原裝微孔芯片。其中mapping 到基因間區(qū)、內(nèi)含子區(qū)和外顯子區(qū)的具體情況見下表:
在初始數(shù)據(jù)質(zhì)控后和表達量統(tǒng)計后,分析過程還會對死細胞、雙細胞、低質(zhì)量細胞和批次效應多種可能存在的偏差因素進行數(shù)據(jù)標準化校正,力求獲得準確無偏差的預處理后的單細胞基因表達數(shù)據(jù)。例如:線粒體占比(percent mito,MT值)常作為判斷捕獲細胞質(zhì)量的參考標準之一(細胞(瀕臨)死亡時,細胞膜通透性改變,胞質(zhì)RNA外流,胞內(nèi)核酸總量減少,但線粒體內(nèi)的核酸受膜保護不會外流,使占比會隨之升高,因此MT值越高,越可能是質(zhì)量差或已死亡的細胞)。
在本次實驗數(shù)據(jù)標準化階段,從基因數(shù)(nFeature),UMI數(shù)(nCount)和MT值等統(tǒng)計情況看,兩種實驗芯片的標準化數(shù)據(jù)結(jié)果非常接近,PanoCell芯片在實驗細胞捕獲和前端數(shù)據(jù)統(tǒng)計方面具備媲美原裝芯片的強大實力。
以上便是此次小編為大家?guī)淼臄?shù)據(jù)分析前端實戰(zhàn)測評結(jié)果。總的來說,PanoCell微孔芯片在捕獲細胞數(shù),基因數(shù),UMI Counts數(shù),mapping率和數(shù)據(jù)標化等關鍵指標上,與BD原裝芯片樣本實驗結(jié)果基本一致,具備優(yōu)良的實驗服務水準,能精確捕獲單個細胞,反映出細胞的轉(zhuǎn)錄狀態(tài),且具備強有力的價格優(yōu)勢!烈冰出品,必屬精品,一站式精準服務,要做就做最懂你的單細胞平臺!
烈冰生物成立于2010年,專注于單細胞測序領域科研服務和設備耗材研發(fā)。自2016年起連續(xù)被評為高新技術企業(yè),已獲得4項專利和36項軟件著作權,實驗平臺方面,烈冰搭建10X/BD單細胞測序雙平臺、流式分選平臺、Novaseq6000 測序平臺和NovelBrain®生信數(shù)據(jù)分析平臺。
烈冰支持每位科研和醫(yī)務工作者,致力于研發(fā)創(chuàng)新技術產(chǎn)品、結(jié)合現(xiàn)有一流高通量測序技術平臺,為用戶提供一流服務和解決方案,目前已發(fā)表Nature Cell Biology,Immunity等國際前沿期刊單細胞測序文章14篇,助力多種腫瘤、腦神經(jīng)、白血病,Covid-19等等多組織疾病類型的高分文獻發(fā)表!
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